SP Silna chromatografia membranowa kationowymienna

Wprowadzenie do produktów do chromatografii membranowej CM o słabych jonach-wymiennych chromatografii membranowej

 

1. Przegląd

Słaba chromatografia kationowymienna CM-jest technologią oczyszczania, w której grupy karboksymetylowe są związane z membraną, tworząc moduł funkcjonalny. Separację osiąga się w oparciu o różnice we właściwościach ładunków i gęstościach ładunków różnych biomolekuł. Ponieważ większość makrocząsteczek biologicznych zawiera grupy karboksylowe lub hydroksylowe, ich charakterystykę ładunku i wielkość można regulować poprzez zmianę wartości pH roztworu buforowego. Po tym, jak biocząsteczki zwiążą się z modułem membranowym niosącym przeciwne ładunki, przeprowadza się elucję poprzez zmianę siły jonowej lub pH fazy ruchomej. Cząsteczki o słabszym powinowactwie wiązania są eluowane w pierwszej kolejności, natomiast te o silniejszym powinowactwie wiązania są eluowane później, uzyskując w ten sposób skuteczny rozdział.

 

2. Zalety produktu

2.1 Szybko i wydajnie: Wysoką zdolność wiązania można osiągnąć przy natężeniu przepływu do 40 razy większym niż konwencjonalna chromatografia na bazie żywicy. W porównaniu z tradycyjną chromatografią-z wypełnieniem, chromatografia membranowa może skrócić czas procesu 30–40 razy. Typowe robocze natężenie przepływu wynosi 10 MV/min.

2.2 Wysoka skuteczność wiązania: Chromatografia membranowa wykazuje wysoką zdolność obciążającą i duże prędkości przepływu w warunkach niskiego spadku ciśnienia, umożliwiając wychwycenie naładowanych biomolekuł podczas jednego przejścia przez moduł.

2.3 Skalowalność i elastyczność: pełna gama produktów do chromatografii membranowej może zaspokoić różnorodne potrzeby w zakresie przetwarzania biomakromolekuł, obejmując etapy od opracowania procesu po produkcję-na dużą skalę. Konstrukcja kapsułki umożliwia zastosowanie-jednorazowo lub można ją wyczyścić i użyć ponownie, jeśli zajdzie taka potrzeba.

2.4 Zwiększona produktywność: Kompaktowa konstrukcja minimalizuje powierzchnię zajmowaną przez obiekt. Eliminując etapy pakowania kolumny, czyszczenia, walidacji czyszczenia i przechowywania kolumny, przetwarzanie można rozpocząć po zrównoważeniu stosunkowo małą objętością buforu. Brak konieczności pakowania, czyszczenia i przechowywania kolumny pozwala obniżyć koszty pracy nawet o ponad 50%.

 

3 Parametry techniczne

3.1 Materiały konstrukcyjne

	Skala laboratoryjna	mała skala	Skala pilotażowa	Skala produkcji
Objętość membrany	0,2 ml	5ml	140ml	5L
Konstrukcja wsporcza membrany	Polipropylen
Obudowa membrany	Polipropylen
O-pierścień	Guma silikonowa

3.2 Charakterystyka robocza

	Skala laboratoryjna	na małą- skalę	Skala pilotażowa-	Skala produkcji
Objętość membrany	0,2 ml	5ml	400ml	5L
Zalecane natężenie przepływu	1-6ml/min	25-150ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Maksymalna temperatura robocza	35 stopni
Maksymalne ciśnienie robocze	3 bary (25 stopni)
Maksymalna różnica ciśnień	3 bary (25 stopni)
Warunki przechowywania	20% roztwór wodny etanolu

W porównaniu z konwencjonalnymi mediami, żywotność chromatografii membranowej CM jest porównywalna z żywotnością żelu agarozowego CM 6FF.

Rycina 1. Zmiany obciążalności chromatografii membranowej CM po wielokrotnych zastosowaniach w badaniu lizozymu.

Dodatkowo oceniliśmy skuteczność usuwania białek i kwasów nukleinowych komórek gospodarza za pomocą chromatografii membranowej. Wyniki przedstawiono poniżej.

Tabela 1. Szybkość usuwania DNA i białek komórek gospodarza w materiale IgG wykazującym ekspresję CHO-przy użyciu chromatografii membranowej CM

Seria eksperymentów wykazała, że ​​chromatografia membranowa CM może skutecznie usuwać zanieczyszczenia przy jednoczesnym utrzymaniu wysokiego stopnia odzysku docelowej IgG

	DNA				pracownik służby zdrowia
	Odzyskiwanie IgG	Zawartość (pg/mg IgG) metodą RT PCR		Czynnik usuwania	Zawartość (ng/mg IgG) według Elisy		Czynnik usuwania
Uruchomić	%	Przed membraną Q	Po membranie Q	Dziennik	Przed membraną Q	Po membranie Q	Dziennik
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Korzystając z chromatografii membranowej Gudiling CM w porównaniu z produktami innych marek, poniżej przedstawiono dane dotyczące nośności.

Pojemność ładowania (mg/ml)	Jingbiao 1	Prowadzenie
Lizozym	18	23
Trypsyna	17	20

Tabela 2. Wydajność ładowania różnych białek w naszym produkcie w porównaniu z produktami konkurencji

Ogólna ocena pokazuje, że nasza ładowność jest porównywalna z produktami importowanymi.

Rycina 2. Test obciążalności modułu chromatografii membranowej CM przy użyciu lizozymu jako białka wzorcowego.

Porównano także nośność dynamiczną z produktami importowanymi. Weryfikacja wykazała, że ​​lizozym można eluować przy użyciu 160 mM NaCl, co umożliwia skuteczne wychwytywanie większości białek docelowych.

Poprzez optymalizację różnych warunków elucji odkryliśmy, że chromatografia membranowa wykazuje zachowanie elucji podobne do chromatografii na żelu agarozowym, gdzie czystość białka różni się znacznie w zależności od stężenia soli. W praktycznych pracach badawczo-rozwojowych i produkcyjnych konieczne jest ilościowe określenie równowagowych warunków elucji, aby uzyskać docelowe białko o wysokiej-czystości.

 

4. Typowe przypadki zastosowań

• Usuwanie DNA, wirusów i białek komórek gospodarza
• Wychwytywanie plazmidów, wirusów i białek, a także oczyszczanie oligonukleotydów
• Odbarwianie drożdżowego bulionu fermentacyjnego i-wychwytywanie białek o dużej wydajności

 

5. Procedura operacyjna/przebieg pracy

5.1: Przygotowanie i montaż sprzętu:

5.1.1: Instalacja modułu chromatografii membranowej w systemie chromatograficznym AKTA. Metoda instalacji jest podobna do mediów do chromatografii ze złożem-z wypełnieniem; upewnić się, że kierunek przepływu jest zgodny ze strzałką zaznaczoną na module. Moduł można podłączyć za pomocą złącz Luer lub złączy zaciskowych.

5.1.2 Ustaw natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i użyj buforu równoważącego, aby usunąć powietrze z modułu. Kontynuuj płukanie, aż na wylocie przestaną być widoczne pęcherzyki, następnie podłącz wylot permeatu do układu chromatograficznego.

5.2.:Przygotowanie-przed użyciem

5.2.1: Ustawić natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i przeprowadzić obróbkę wstępną przy użyciu 0,5 M NaOH przez ponad 5 MV, aby zapewnić osiągnięcie przez membranę równowagi.

5.2.2:W tych samych warunkach natężenia przepływu wykonaj-obróbkę wstępną 1 M NaCl przez ponad 5 MV, aby zapewnić osiągnięcie przez membranę równowagi.

5.3. Proces chromatograficzny

5.3.1 Ustawić natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i przeprowadzić-obróbkę wstępną buforem równoważącym pod napięciem większym niż 5 MV, aż membrana osiągnie równowagę.

5.3.2 Po-filtracji wstępnej 0,22 μm, załaduj próbkę na kolumnę i kontynuuj, aż do nałożenia całej próbki lub osiągnięcia wydajności chromatograficznej.

5.3.3 Przemyć buforem równoważącym przez ponad 10 MV, aż wartość UV spadnie do linii podstawowej.

5.3.4 Zgodnie z projektem procesu, zastosuj elucję gradientową lub system elucji liniowej i zbieraj frakcje w segmentach, zgodnie z wymaganiami.

5.4 Obróbka CIP-po użyciu – CIP (Clean-in-Place) dla systemu chromatografii membranowej.

5.4.1 Ustaw natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i traktuj 1 M NaOH przez ponad 10 MV, aż wartość UV spadnie poniżej linii bazowej.

5.4.2 Po 30 minutach mycia z obiegiem spłucz wodą, aż pH osiągnie wartość pomiędzy 7 a 8, następnie przełącz na 20% etanol i kontynuuj czyszczenie, aż przewodność pozostanie prawie niezmieniona.

5.5 Przechowywanie metodą chromatografii membranowej

Po użyciu i zakończeniu procesu CIP moduł membranowy można wyjąć i przechowywać poprzez namoczenie w 20% etanolu lub przechowywać online w temperaturze pokojowej w roztworze zawierającym 20% etanolu. Należy regularnie sprawdzać i wymieniać 20% roztwór etanolu.

 

6, Informacje o zamówieniu

Filtr kapsułkowy typu CM- ze słabą membraną kationowymienną

	Skala laboratoryjna	Mała skala	Skala pilotażowa	Skala produkcji
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Obszar membrany	0,2 ml	5ml	400ml	5L

Popularne Tagi: sp silna chromatografia membranowa kationowymienna, Chiny, dostawcy, producenci, fabryki, hurtownia, luzem, w magazynie, bezpłatna próbka