DEAE Słaba chromatografia membranowa anionowymienna

Chromatografia na słabej membranie anionowymiennej DEAE – wprowadzenie produktu

 

1. Przegląd

Słaba chromatografia anionowymienna DEAE jest techniką oczyszczania opartą na różnicach we właściwościach ładunku i gęstości ładunku różnych biomolekuł. Ponieważ większość biomakrocząsteczek zawiera grupy funkcyjne, takie jak grupy karboksylowe lub hydroksylowe, ich charakterystykę ładunku i wielkość można regulować, modyfikując pH roztworu buforowego. Po związaniu się biomolekuł z przeciwnie naładowanym ośrodkiem anionowym lub kationowymiennym, separację osiąga się poprzez zmianę siły jonowej lub pH fazy ruchomej. W pierwszej kolejności eluowane są cząsteczki o słabszym powinowactwie wiązania, a następnie cząsteczki o silniejszym powinowactwie wiązania, co zapewnia skuteczną separację

 

2. Zalety produktu

2.1 Wysoka wydajność: zapewnia silne wiązanie przy prędkościach przepływu do 40 razy większych niż w przypadku chromatografii na bazie żywicy. W porównaniu z tradycyjną chromatografią-z wypełnieniem, chromatografia membranowa skraca całkowity czas procesu około 30–40 razy.

2.2 Wysoka skuteczność wiązania: Chromatografia membranowa wykazuje wysoką zdolność wiązania i duże natężenie przepływu przy niskim spadku ciśnienia, co pozwala na wychwycenie naładowanych biomolekuł w jednym przejściu przez kolumnę.

2.3 Skalowalna i elastyczna: pełna seria produktów do chromatografii membranowej może zaspokoić różnorodne potrzeby w zakresie oczyszczania biomakromolekuł, obejmując wszystkie etapy, od opracowania procesu po produkcję-na dużą skalę. Konstrukcja typu kapsułki- umożliwia zarówno jednorazowe-użycie, jak i ponowne użycie po czyszczeniu.

2.4 Zwiększona produktywność: Kompaktowa konstrukcja minimalizuje powierzchnię zajmowaną przez obiekt. Eliminując procedury pakowania, czyszczenia, walidacji czyszczenia i przechowywania kolumny, system może działać bezpośrednio po zrównoważeniu buforu, bez pakowania i przechowywania kolumny. Koszty pracy można obniżyć nawet o 50%.

 

3. Parametry techniczne

3.1 Materiały konstrukcyjne

	skala laboratoryjna	mała skala	skala pilotażowa	skala produkcji
Objętość membrany	0,2 ml	5ml	140ml	5L
Konstrukcja wsporcza membrany	Polipropylen (PP)
Obudowa membrany	Polipropylen (PP)
O-pierścień	Silikon

3.2 Charakterystyka robocza

	skala laboratoryjna	mała skala	skala pilotażowa	Skala produkcji
Objętość membrany	0,2 ml	5ml	400ml	5L
Zalecane natężenie przepływu	1-6ml/min	25-150ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Maksymalna temperatura robocza	35 stopni
Maksymalne ciśnienie robocze	3 bary (25 stopni)
Maksymalna różnica ciśnień	3 bary (25 stopni)
Warunki przechowywania	20% 乙醇水溶液 20% roztwór wodny etanolu

Rycina 1. Zmiany w obciążalności chromatografii membranowej po wielokrotnych użyciach monitorowane za pomocą BSA.

Dodatkowo oceniliśmy skuteczność usuwania białek i kwasów nukleinowych komórek gospodarza za pomocą chromatografii membranowej DEAE. Wyniki są następujące.

	DNA				pracownik służby zdrowia
	Odzyskiwanie IgG	Zawartość (pg/mg IgG) metodą RT PCR		Czynnik usuwania	Zawartość (ng/mg IgG) według Elisy		Czynnik usuwania
Uruchomić	%	Przed membraną DEAE	Po membranie DEAE	Dziennik	Przed membraną DEAE	Po membranie DEAE	Dziennik
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tabela 1. Szybkość usuwania DNA i białek komórek gospodarzy z IgG wyrażanych w CHO-przy użyciu chromatografii membranowej DEAE.

Seria eksperymentów wykazała, że ​​chromatografia z membraną Q może skutecznie usuwać zanieczyszczenia, zachowując jednocześnie wysoki stopień odzysku docelowej IgG.

Ponadto porównaliśmy chromatografię membranową Gudiling z importowanymi markami, a dane dotyczące nośności są następujące.

Rysunek 2. Wydajność ładowania różnych białek w naszej chromatografii membranowej i produktach konkurencji

Ogólna ocena pokazuje, że nasza ładowność jest porównywalna z produktami importowanymi.

Rysunek 3. Działanie modułu chromatografii membranowej DEAE w badaniu białek kolagenowych

Wyniki walidacji przy użyciu modułu chromatografii membranowej DEAE wykazały, że większość docelowych białek kolagenowych można wychwycić i wymyć przy użyciu 135 mM NaCl.

Testując różne warunki elucji, odkryliśmy, że chromatografia membranowa i chromatografia na żelu agarozowym wykazują podobne zachowanie przy elucji, gdzie czystość białka różni się znacznie w zależności od różnych stężeń soli. W praktycznych pracach badawczo-rozwojowych i produkcyjnych konieczne jest ilościowe określenie optymalnych warunków elucji równowagowej, aby uzyskać białka docelowe o wysokiej-czystości.

 

4. Klasyczne przypadki aplikacyjne

Usuwanie DNA, wirusów, białek komórek gospodarza i endotoksyn

Wychwytywanie plazmidów, wirusów, kwasów nukleinowych i białek, a także oczyszczanie oligonukleotydów

 

5. Przebieg pracy operacyjnej

5.1: Przygotowanie i montaż sprzętu

5.1.1 Moduł chromatografii membranowej należy zainstalować w systemie chromatograficznym AKTA w sposób podobny do kolumn z żywicą z wypełnieniem, upewniając się, że kierunek przepływu jest zgodny ze strzałkami i kierunkiem wlotu. Podłącz za pomocą złączy Luer lub złączek zaciskowych.

5.1.2 Ustawić natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i użyć buforu równoważącego do usunięcia powietrza. Kontynuuj płukanie, aż na wylocie przestaną być widoczne pęcherzyki, następnie podłącz wylot permeatu do układu chromatograficznego

5.2:Zabieg-przed użyciem

5.2.1: Ustaw natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i wykonaj-obróbkę wstępną 0,5 M NaOH przez ponad 5 MV, aby zapewnić osiągnięcie przez membranę równowagi.

5.2.2: Przy tym samym natężeniu przepływu należy dalej-poddawać wstępnej obróbce buforem równoważącym (1× PBS) pod napięciem większym niż 5 MV, aby zapewnić osiągnięcie przez membranę równowagi.

5.3 Proces chromatograficzny

5.3.1

Ustaw natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i-poddaj wstępnej obróbce buforem równoważącym przez ponad 5 MV, aż membrana osiągnie równowagę.

5.3.2

Po wstępnym-przefiltrowaniu próbki przez filtr 0,22 μm, należy ją obciążać do momentu zakończenia ładowania lub osiągnięcia wydajności chromatograficznej.

5.3.3

Przemywać buforem równoważącym przez ponad 10 MV, aż absorbancja UV spadnie do poziomu podstawowego.

5.3.4

Zastosuj elucję gradientową lub elucję liniową zgodnie z projektem procesu i w razie potrzeby pobierz próbki we frakcjach.

5.4, ​​Obróbka po użyciu CIP- – CIP urządzenia do chromatografii membranowej

5.4.1

Ustaw natężenie przepływu na wlocie na 5–10 MV/min i wykonaj czyszczenie-w-miejscu (CIP) za pomocą 0,5 M NaOH przez ponad 10 MV, aż absorbancja UV spadnie poniżej linii bazowej.

5.4.2

Po 30 minutach mycia obiegowego przełączyć na mycie wodą, aż pH osiągnie wartość pomiędzy 7–8, a następnie kontynuować czyszczenie 20% etanolem, aż przewodność pozostanie prawie stała.

5.5, Przechowywanie w chromatografii membranowej:

Po użyciu i zakończeniu procesu CIP moduł membranowy można wyjąć i przechowywać poprzez namoczenie w 20% etanolu lub przechowywać w temperaturze pokojowej w 20% roztworze etanolu. Należy okresowo sprawdzać i wymieniać 20% roztwór etanolu.

 

6. Informacje dotyczące zamówienia

Filtr kapsułkowy do chromatografii ze słabą membraną anionowymienną typu DEAE-

	Skala laboratoryjna-	mała skala	Skala pilotażowa	Skala produkcji
Model produktu	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Objętość membrany	0,2 ml	5ml	400ml	5L

Popularne Tagi: deae słaba chromatografia membranowa anionowymienna, Chiny, dostawcy, producenci, fabryki, hurtownia, luzem, w magazynie, bezpłatna próbka