Często zadawane pytania dotyczące odśrodkowych urządzeń filtrujących

Q1. Konieczne jest rozdzielenie białek o różnych masach cząsteczkowych, więc jak dużej różnicy powinny wymagać masy cząsteczkowe białek?

O: Wielkość obu białek musi różnić się co najmniej 10 razy.

 

Q2. Można odwirowaćglinurządzenia filtrujące były sterylizowane i odporne na mycie alkaliami?

Odp.: Można ją sterylizować 75-procentowym wodnym roztworem etanolu, a membrana jest odporna na mycie zasadą 0.1-0,5 N wodorotlenkiem sodu.

 

Q3. Jak sobie radzić, jeśli białko wytrąciło się podczas zatężania?

Odp .: Jeśli białko jest skoncentrowane zbyt szybko lub zbyt skoncentrowane, może to spowodować wytrącenie białka, a końcowe stężenie białka po zatężeniu nie powinno być zbyt wysokie; Białka, które są wrażliwe na szybkość koncentracji i mają tendencję do wytrącania się, sugerowana metoda poprawy:

Zmniejsz prędkość wirowania

Użyj membrany ultrafiltracyjnej o wyższej wartości granicznej masy cząsteczkowej

Przedmuchać i zassać skoncentrowaną probówkę, a następnie odwirować

 

Q4. Jaki jest możliwy powód, dla któregoodśrodkowe urządzenia filtrującenie można odwirować?

O: Możesz użyć około 20-procentowego wodnego roztworu etanolu do wstępnego wirowania, jeśli probówka ultrafiltracyjna nie może być odwirowana, ponieważ membrana ultrafiltracyjna jest całkowicie sucha, powierzchnia membrany jest słabo hydrofobowa, a strumień można przywrócić po infiltracji niskim rozpuszczalnik napięcia powierzchniowego.

 

Q5. Prawidłowe metody użytkowania i przechowywania odśrodkowych urządzeń filtrujących

O: Odśrodkowe urządzenia filtrujące należy przed użyciem odwirować z oczyszczoną wodą, aby sprawdzić ich integralność. Po każdym użyciu należy ją przechowywać w stanie mokrym, aby zapobiec wysychaniu membrany.

 

Q6. W jaki sposób filtry odśrodkowe usuwają endotoksyny?

Odp.: Dostarczone przez nas filtry odśrodkowe nie zostały poddane działaniu endotoksyn, a ponieważ endotoksyny występują powszechnie w przyrodzie, próbki, które wymagają endotoksyn, można przed eksperymentem wstępnie oczyścić 0,5 N wodorotlenkiem sodu, a następnie przemyć Woda RO, aby usunąć większość endotoksyn.

 

Q7. Kiedy skoncentrowane białko jest używane do dalszej analizy, okazuje się, że występuje interferencja, jaki jest tego powód?

Odp.: Odśrodkowe urządzenia filtrujące można wstępnie przemyć roztworem buforowym lub wodą oczyszczoną. Jeśli interferencja nadal występuje, przemyj 0,1 N wodorotlenkiem sodu, a następnie przemyj oczyszczoną wodą.

 

Q8. IStwierdza się, że po zatężeniu w koncentracie nie ma białka docelowego. Jakie są możliwe przyczyny?

Odp .: 1) Początkowe stężenie białka nie powinno być zbyt niskie, jeśli stężenie jest zbyt niskie, membrana może nie być w stanie się zatrzymać.

2) Wybierz odpowiednią wielkość porów membrany. Stężenie odśrodkowe rurki filtracyjnej należy do filtracji ślepej, a wielkość porów membrany jest na ogół mniejsza niż 2 razy lub większa niż białko docelowe.

3) Wybierz odpowiednią prędkość wirowania

4) Czy białko docelowe wytrąca się

 

Q9. Obróbka pasywacyjna odśrodkowych urządzeń filtracyjnych

Odp .: Wstępna obróbka pasywacyjna powierzchni urządzeń filtrów odśrodkowych może zmniejszyć utratę adsorpcji białka na powierzchni membrany, w większości przypadków wstępna obróbka kolumny przed zatężeniem rozcieńczonego roztworu białka może poprawić odzyskiwanie, ponieważ roztwór może wypełnić odsłoniętą puste miejsca adsorpcji białka na membranie i powierzchni, metoda pasywacji polega na wstępnym namoczeniu kolumny dużą objętością roztworu pasywacyjnego przez ponad 1 godzinę, dokładne przepłukanie kolumny wodą destylowaną, a następnie jednokrotne odwirowanie kolumny wodą destylowaną aby całkowicie usunąć roztwór pasywacyjny, który mógł pozostać na membranie, uważaj, aby nie dopuścić do wyschnięcia membrany po pasywacji, jeśli chcesz ją zachować do przyszłego użytku, musisz dodać sterylnej wody destylowanej, aby membrana była mokra., prosimy o kontakt naszych inżynierów w zakresie wspólnych rozwiązań pasywacyjnych.

 

Q10. Czy membrana ultrafiltracyjna filtruje cząsteczki w sposób hierarchiczny?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 procent przy użyciu membrany ultrafiltracyjnej 100 kd, jednak cząsteczki mniejsze niż rozmiar porów membrany nie przechodzą całkowicie swobodnie przez membranę. Współczynnik retencji molekularnej 67 kd wynosi ponad 70 procent, a białko 43 kd jest również odcięte o ponad 40 procent, różne składniki w mieszanym roztworze przechodzą przez membranę nie tak prosto i łatwo, jak roztwór jednoskładnikowy, w praktyce , jeśli chcesz wyizolować dwie makrocząsteczki, różnica masy cząsteczkowej między nimi powinna wynosić co najmniej osiem razy.

 

Q11. Jak skutecznie oddzielić duże i małe cząsteczki poprzez ultrafiltrację?

Odp .: Ze względu na potrzeby procesu, zanieczyszczenia w makrocząsteczkach są usuwane lub małe cząsteczki są usuwane z makrocząsteczek, jest to normalne w produkcji. Bardzo ważny jest dobór odpowiedniej wielkości porów membrany, metody filtracji oraz warunków pracy. Ogólnie rzecz biorąc, jeśli specyfikacja MWCO błony zostanie wybrana między dwoma białkami, można osiągnąć stosunkowo idealny rozdział. Jeśli roztwór białka jest stosunkowo rozcieńczony, praca pod niskim ciśnieniem również pomoże osiągnąć lepsze wyniki. Wybierz filtrację z przepływem stycznym i wykonaj wielokrotną diafiltrację, aby uzyskać lepszy efekt separacji.