Wydajny i tani sposób klarowania i ultrafiltracji rekombinowanych białek wykazujących ekspresję w drożdżach

Ekspresja genów egzogennych w drożdżach może nie tylko wytwarzać rekombinowane białka i peptydy, przeciwciała i szczepionki, cytokiny, czynniki wzrostu, hormony i inne substancje bioaktywne, ale także może być wykorzystywana do produkcji enzymów przemysłowych, żywności funkcjonalnej i materiałów biologicznych, co ma szerokie perspektywy zastosowania .

 

Drożdżowy system ekspresyjny obejmuje dwa powszechnie stosowane systemy ekspresyjne, to jest system ekspresyjny Saccharomyces cerevisiae i system ekspresyjny drożdży metanotroficznych. System ekspresji drożdży metanolowych jest obecnie najpowszechniej stosowanym systemem ekspresji drożdży, a najczęściej stosowanym jest Pichia, który może wykorzystywać metanol jako węgiel i energię. Ponadto istnieją drożdże Hansena, Sphaeroides i tak dalej.

 

Bez względu na rodzaj systemu ekspresji w drożdżach, dalsze procesy separacji i oczyszczania są podobne, a specyficzny przebieg procesu obejmuje jako przykład ekspresję rekombinowanych białek i leków polipeptydowych w drożdżach.

 

Prowadzące kasety membranowe do mikrofiltracji wykorzystują tryb filtracji z otwartym kanałem przepływu i przepływem stycznym, który może skutecznie przetwarzać z dużą prędkością złożoną ciecz zasilającą, taką jak ciecz fermentacyjna drożdży i ciecz krakująca E. coli, i może zapewnić liniowe wzmocnienie od małego testu do skali produkcyjnej. Kompaktowa modułowa konstrukcja, proste podłączenie rurociągu, niezależność i czytelność systemu mogą chronić operatorów i zapobiegać zanieczyszczeniom biologicznym. I brak weryfikacji konserwacji i czyszczenia. Dlatego jest bardzo odpowiedni do etapu klarowania na wczesnym etapie dalszego przetwarzania.

 

Głównym celem procesu UF/DF jest usunięcie zanieczyszczeń i wyparcie buforów. Prowadząca kaseta membranowa do ultrafiltracji ma dobrą jednorodność wielkości porów membrany i silną hydrofilowość, co może zapewnić membranie większy przepływ i niższą adsorpcję białka, a także zoptymalizowaną konstrukcję kanału przepływowego, z mniejszym spadkiem ciśnienia, łatwym przenoszeniem materiału i znacznie skracającym czas filtracji. Co więcej, seria produktów jest kompletna i elastyczna, aby sprostać potrzebom różnych zastosowań w różnych skalach. Dlatego jest bardzo odpowiedni dla etapu dalszego przetwarzania UF/DF.

 

Poniżej przedstawiono przypadek zastosowania membrany Guidlingkasetaw ekspresji rekombinowanych białek w drożdżach.

 

Wyjaśnienie mikrofiltracji

Użyliśmy kasety membranowej o wymiarach {{{0}},11 metrów kwadratowych o porach 0,22 μm do klarowania 1,5 l cieczy fermentacyjnej drożdży (docelowa masa cząsteczkowa białka 42-55 KD) metodą mikrofiltracji. W całym procesie mikrofiltracji badano stopień odzysku docelowego białka, zmianę zmętnienia i zmniejszenie strumienia membranowego.

0-17min to proces zatężania, 17-32min to proces mycia i filtracji. Podczas całego procesu mikrofiltracji TMP stopniowo wzrastało, prędkość wlotu cieczy pozostawała niezmieniona, a średni strumień materiału wynosił 45LMH.

Zmętnienie cieczy wynosiło 600 NTU przed mikrofiltracją i 8 NTU po mikrofiltracji, przy czym zmętnienie uległo wyraźnej zmianie.

Wyniki wykazały, że wydajność docelowego białka wynosiła > 90%. Kaseta z membraną Guidling Technology o grubości 0,22 μm jest stabilna i odpowiednia do tego scenariusza zastosowania.

 

Stężenie ultrafiltracyjne

 

 

Wyniki pokazały, że docelowe białko zostało całkowicie uwięzione. Kasety membranowe Guidling Technology 10 kd mogą pracować stabilnie i są odpowiednie dla tego scenariusza zastosowania.

Większość rekombinowanych białek ulegających ekspresji w drożdżach nie ulegała silnej ekspresji. Mętność przefiltrowanej cieczy została wyraźnie zmniejszona, a stopień odzysku białka był wyższy. Ponieważ kolejny czas chromatografii jest zbyt długi, spowoduje to niekorzystne skutki dla białka, aby skrócić czas pobierania próbek chromatograficznych, można dodać jeden etap zatężania ultrafiltracji, a docelowe białko można szybko zatężyć po próbce, co może osiągnąć cel, jakim jest oszczędność czasu, zmniejszenie objętości wypełniacza, a tym samym zmniejszenie kosztów produkcji.

 

Kasety membranowe do mikrofiltracji Guidling Technology mogą ogólnie zmniejszyć zmętnienie cieczy zasilającej do mniej niż 20 NTU, w pełni spełniając potrzeby późniejszej ultrafiltracji i chromatografii. Stopień odzysku ultrafiltracji w przypadku kaset z membranami ultrafiltracyjnymi będzie się różnić w zależności od różnych materiałów. Ogólny współczynnik odzysku może osiągnąć 90-95%.

Guidling Technology zaprasza do zamawiania zestawów testowych do powiązanej oceny.

 

O Guidlingu

Guidling Technology to krajowe przedsiębiorstwo high-tech skupiające się na biofarmaceutykach, hodowlach komórkowych, oczyszczaniu i zatężaniu biomedycyny, diagnostyce i płynach przemysłowych. Z sukcesem opracowaliśmy urządzenia do filtrów odśrodkowych, kasety do ultrafiltracji i mikrofiltracji, filtry wirusowe, systemy TFF, filtry wgłębne, włókna kanalikowe itp., które w pełni spełniają scenariusze zastosowań biofarmaceutyków, hodowli komórkowych i tak dalej. Nasze membrany i filtry membranowe są szeroko stosowane w zatężaniu, ekstrakcji i separacji przed filtracją wstępną, mikrofiltracją, ultrafiltracją i nanofiltracją. Nasze liczne linie produktów, od małych jednorazowych filtrów laboratoryjnych po produkcyjne systemy filtracji, badania sterylności, fermentacja, hodowle komórkowe i inne, spełniają potrzeby testowania i produkcji. Guidling Technology z niecierpliwością czeka na współpracę z Tobą!